体液葡萄糖检验

1、医学检验系 林勇平,体液葡萄糖检验,2004-02-26,第九章,教学目的与要求:,1. 复习血糖的来源与去路；掌握激素对血糖的调节作用 2. 掌握以糖尿病为代表的高血糖症的主要代谢紊乱及其机制 3. 掌握糖尿病的生化检测项目（血糖、尿糖、OGTT、糖化蛋白和胰岛素等） 4. 熟悉低血糖症的常见原因；了解某些糖代谢先天性异常的生化机制,糖的重要生理功能,1.氧化供能 2. 人体的主要组成成分之一 糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；转化成脂肪和某些非必需氨基酸等,第一节 概 述,糖的重要生理功能,一、血糖的来源、去路和调节(一)糖的来源与去路,(二)血糖浓度的调节,1.肝脏的调节 肝脏内糖代谢途径多

2、，其中有的为其特有，它是调节血糖的主要器宫。 2. 神经系统的调节 主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路中关键酶的活性来实现。,3.激素的调节作用,降低血糖的激素：胰岛素（insulin） 升高血糖的激素：胰高血糖素、肾上腺素、糖皮质激素、甲状腺素、生长素等。,（1）降低血糖的激素胰岛素（insulin）,胰岛素的作用机制：,受体 胰岛素+C肽前胰岛素胰岛细胞 （细胞） cAMP ATP 膜通透性G转运 氧化产能 糖原合成 降低血糖 酶活性 脂肪合成 肝细胞 蛋白质合成,胰岛素的生物活性：,靶细胞上胰岛素受体的绝对数目或绝对数目。 到达靶细胞的胰岛素浓度

3、。 胰岛素与靶细胞受体的亲和力。 胰岛素与受体结合后的细胞内改变情况等。,胰岛素的作用,促进肌肉、脂肪组织细胞膜对糖摄 取，膜通透性 促进肝糖原合成 肝葡萄糖激酶活性，加速糖氧化 分解 促进糖转化成脂肪、蛋白质 抑制糖异生（-）,胰高血糖素由a细胞分泌的一种29aa氨基酸残基的多肽。肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种胺类激素。其作用均是通过与特异性受体结合，增加细胞内cAMP和Ca2+浓度。均能促进肝糖原分解成血糖及促进糖异生。,（2）升高血糖的激素,胰高血糖素和肾上腺素,糖皮质激素：肾上腺皮质分泌的类固醇激素，主要促进糖异生和促进单糖的吸收。 甲状腺激素 ：具有双向作用，但总的趋势为升血糖。,部

4、分激素对糖代谢的调节,二、糖代谢紊乱,1、概念 高血糖症：指空腹血糖浓度超过7.3mmol/L,有生理性和病理性之分，临床上最常见的病理性高血糖症是糖尿病。 糖尿病：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病,系胰岛素绝对不足或相对不足，以高血糖症为基本生化特点。同时伴有糖、脂类、蛋白质、水、电解质和酸碱平衡紊乱，甚至出现一系列并发症如眼、肾的微血管病变及神经病变等。,（一）、高血糖症与糖尿病,2.糖尿病的诊断标准,症状+随机血浆葡萄糖 11.1mmol/L,或空腹血浆葡萄糖 7.0mmol/L,或OGTT两小时血浆葡萄糖 11.1mmol/L。症状不典型者，需另一天再次证实。随机血糖是指一天中的任一时

5、间采血测得的血糖浓度。,3.糖尿病的分类,IDDM：也称型糖尿病，好发于青春期，对胰岛素敏感。 NIDDM： 型，常见于中年肥胖病人，病变在于靶细胞膜上的胰岛素受体的数目减少或者缺陷，因而对胰对胰岛素不敏感。 继发性糖尿病：如嗜铬细胞瘤、库欣病等，或其它因素。,两类原发性糖尿病的特征,特 征 1型 2型 基本病因 遗传+环境 发病机制 自身免疫性疾病 生物活性降低 占DM% 15% 85%（可发展为1型） 发病年龄 通常20岁 40岁 身体肥胖 罕见 多见 血胰岛素 （绝对不足）或（相对不足） 病情及酮症 较重、常见 较轻、少见 治疗 胰岛素敏感 控制饮食、减肥,4、糖尿病的代谢变化,糖尿病会

6、导致糖、蛋白质和脂肪代谢的改变，表现为高血糖症、高脂血症和酮酸血症及乳酸血症等。,（1）高血糖症,Insulin绝对/相对不足胰岛素/胰高血糖素比值 利用葡萄糖减少； 肝糖原输出增多；肝、肾糖异生作用增强,（2）糖尿、多尿及水盐丢失,血糖过高超过肾糖阈时出现尿糖，严重者尿中可出现酮体。 尿中的葡萄糖和酮体分泌增加产生渗透性利尿，引起多尿及水盐丢失。,（3）高脂血症及高胆固醇血症,胰岛素/胰高血糖素比值 TG , VLDL高脂血症（型） 脂肪 游离脂肪酸 分解 乙酰辅酶A高胆固醇血症 酮体酮症酸中毒,当酮体产生过多，超过肝外周织的氧化能力时，会形成酮血症和酮尿症。 乙酰乙酸和 羟丁酸均为酸性物质

7、，产生过多进入血液可导致酸中毒。,（4）酮血症,血液 肝细胞 糖原（分解） （高血糖） 磷酸戊糖+NADPH 葡萄糖 葡萄糖 G-6-P 蛋白质（动员） （酮血症） 乳酸 丙酮酸 氨基酸 酮体 酮 体 （高Ch） 乙酰CoA 脂肪酸 胆固醇 胆固醇 TCA循环 甘油三脂（动员）,代谢紊乱及其联系图,代谢紊乱特点,以高血糖症为基本生化特点，同时伴有糖、脂类、蛋白质、水、电解质和酸碱平衡紊乱的一组临床综合症。 糖代谢紊乱：高血糖、糖尿； 脂类代谢障碍：高脂血症； 蛋白质代谢障碍：体重减轻，生长迟缓； 水、电解质、酸碱平衡紊乱：酮症酸中毒，高渗透压；,代谢紊乱症群（三多一少）,高渗性利尿多尿 多尿口

8、渴多饮 糖利用障碍能量代谢紊乱饥饿多食 Pro/Lipid分解和脱水体重减轻,概念：血糖浓度低于2.2mmol/L称为低血糖症，临床上出现一系列因血糖浓度过低的症侯群。 原因激素效应 肝病变 长期饥饿或剧烈运动 分类空腹性低血糖 刺激性低血糖,（二）低血糖症,（三）酮症,糖尿病酮症酸中毒(diabetic ketoacidosis,DKA),第一节 体液葡萄糖的测定,无机化学法 有机化学法 酶法,一、血糖的测定,（一）无机化学法（氧化还原法）,方法 类型 原 理 用途及备注 班氏法 半定量 G+Cu+Cu2O 尿糖测定 （Benedict） 磷钼酸法 定量 G+Cu+Cu2O 历史意义 （Fo

9、lin-Wu）分光 Cu+ 磷（砷）钼酸盐 操作复杂、 需制滤液、 砷钼酸法 同上 蓝色络合物 特异性差、 新铜试剂法 （660nm） 受还原物质影响 结果偏高10% 碱性高铁 同上 G+Fe(CN)6-3 Fe(CN)6-4 历史意义 氰化物法 黄色 无色 Technicon曾用,（二）有机化学法（缩合法）,方法 类型 原 理 用途及备注 邻甲苯胺 定量 G+邻甲苯胺G基胺 操作简便、 法（630nm） 无需滤液、 特异性较高， 中小医院使 用普遍，很 少用于自动,邻甲苯胺法,（三）酶 法,方法 类型 原 理 用途及备注 己糖激酶 定量 G+ATPG-6-P+ADP 血清尿液脑脊液、 （HK

10、）法 分光 G-6-P + NADP+ 公认参考方法 动态 GA-6-P + NADPH 操作简便，特异 终点 （340nm） 性和灵敏性均高 手工、自动化分析 葡萄糖氧 同上 G+O2 GA+H2O2 推荐常规方法 化酶（POD） H2O2 + 染料有色染料 偶联法 （还原型） （氧化型） 可制试纸片定量 （Trinder） （4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 红色琨类化合物505nm）,方法 类型 原 理 用途及备注 葡萄糖氧 定量 G+O2 GA+H2O2 与HK法有最佳 化酶氧消 电化学 用O2电极作极谱测定， 相关性 耗法 动态 求O2的消耗量 （CX3生化仪） 终点 葡萄糖脱

11、定量 G + NAD+GA + NADH 偶有使用 氢酶（GDH）分光 （340nm）可自动化分析 法 动态,葡萄糖氧化酶法,已糖激酶法,方法学评价与临床意义,生理性或暂时性高血糖 病理性高血糖 生理性或暂时性高血糖 病理性低血糖 药物的影响,二、糖耐量试验,耐糖现象： 糖耐量下降： 糖耐量试验： 口服葡萄糖耐量试验（OGTT）：,（一）葡萄糖耐量试验,口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,适应症 空腹血糖水平在临界值而又疑似糖尿病患者 空腹或餐后血糖水平正常，但有发展为糖尿病的可能。 以前糖耐量试验异常的危险人群 妊娠性糖尿病的诊断 临床上出现肾病、神经病变和视网膜病而无法解释者 流行病学研究的手

12、段 标准化 参考范围,三、血清糖化血红蛋白测定,糖化血红蛋白A1C,HbA1a HbA1a1 * HbA(97%) HbA1a2 * Hb HbA2(2.5%) HbA1b HbF (0.5%) HbA1c,糖化血红蛋白A1C为血红蛋白A中2条链N端的缬氨酸与葡萄糖非酶化结合而成,其量与血糖浓度呈正相关,且为不可逆反应.,GHb测定方法,阳离子树脂交换层析法*：常规方法，精密度高、操作简便、受HbF正干扰；GHb 5-8% 亲和层析：常规方法，灵敏度高、操作简便、高度特异、干扰少；GHb 5-8%、GHbA1 3-6% HPLC：参考方法,四、糖化血清白蛋白(GSP),形成机制与糖化血红蛋白相似，蛋白质的糖化主要发生在赖氨酸的-氨基上，糖化的白蛋白和其他蛋白质即称为果糖胺。,层析法：柱层析、亲和层析 比色法： 果糖胺 环状衍生物 有色化合物 强酸 硫代巴比妥酸 果糖胺 四氮唑蓝（氧化型） 四氮唑蓝（还原型） 紫红色 530nm,五，六、 血浆胰岛素和C-肽测定,血胰岛素测定对评价B细胞功能有重要意义.(RIA,ELISA) C肽和Insulin以等分子数生成及释放,由于C肽清除率慢,肝对C肽摄取率低,且不受外源