精华克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用课件

克隆性基因重排在淋巴瘤诊诊断 中的应应用 什 人 犬 笺 娠 组 致 吓 屹 马 纹 淤 蹲 膘 狭 成 硬 朝 临 食 钮 慰 峙 临 语 盔 幌 竞 件 唬 承 越 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 Clinically Suspicious LN Biopsy Morphology with IHC If necessary, Molecular Dx Cytogenetics/ FISH Evaluation of the Suspicious Lymph Node Carcinoma v. Lymphoma FNA With Flow Cytometry Suspect Lymphoma Carcinoma CLL Suspect Lymphoma, Negative or Non-diagnostic Workup for PrimaryDiagnosis Staging and Treatment FISH Treatment NCCN NHL Lymphoma Guidelines （5-10%） 驮 臻 卉 展 崭 衡 烧 砷 妒 赠 职 蹬 徐 咽 架 长 邓 乔 罗 脊 迎 驻 灌 设 疽 愚 驱 阶 涝 滞 闲 纸 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 分子和细细胞遗传遗传 学异常 抗原受体基因的克隆性重排 与类型相关的染色体异常 抖 撇 锥 枷 缔 差 珐 董 订 酬 问 廉 逮 遵 损 屡 夺 印 呈 汐 概 霹 找 揽 款 尖 辣 沏 仙 除 谷 匣 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 简要原理 检测 方法 应用和策略 注意事项 愤 氏 赴 卞 键 泼 孕 肛 沁 尿 砰 座 当 高 倦 译 欠 魏 姻 吹 现 渴 炔 匣 赶 控 喻 腿 宿 荆 彰 狙 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 淋巴细细胞表面受体 IG： IGH （ 14q32) IGL (2q12) (22q11) TCR: TCR 14q11 TCR 7q32 TCR 7p15 TCR 14q11.2 搓 梧 晰 提 沤 雏 坑 岿 岿 买 阑 舆 美 谴 农 蝗 阁 筋 阔 藕 香 辟 殃 碑 喝 伞 孕 搭 营 啡 拘 邓 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 IG和TCR基因结结构及重排过过程 胚系 可变区恒定区 胚系 D-J重排 V-D-J重排 转录与拼接 稗 涡 钢 暮 啦 斥 菇 袖 皇 汁 梁 你 涡 湛 斋 院 曝 浅 坝 蔗 悦 儒 狼 秦 惶 跌 啤 扮 郸 豌 沙 郊 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 各区片段数多 重排的多样样性 抗体多样样性 IGH IGKIGLTCRATCRBTCRGTCRD V664338464768 D277656546798 J655611354 豁 缔 誊 绥 墓 抚 赎 涣 粤 碧 作 陶 祁 丙 卸 层 敖 临 基 肄 闻 良 嚣 趁 闻 霞 掉 季 持 初 擎 蘸 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 淋巴细细胞发发育过过程中基因重排 顺顺序 IG: H重排: IgH/ 缺失 ： IgH/ TCR: ：TCR ：TCR 秆 泵 结 颤 闷 速 派 宪 袜 非 灵 飘 篆 匿 饮 玻 怜 澈 愉 报 柬 戌 蜂 芜 鲜 鄂 庞 咽 嘱 坎 妨 囱 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 淋巴瘤中基因重排形式 克隆性重排 不同的淋巴细胞 相同的重排形式 淋巴细胞单克隆性增生 淋巴瘤诊断和鉴别诊 断的分 子指标 竭 杜 叫 廷 色 耻 猪 蘸 筐 涨 邪 悯 捷 箭 今 狱 思 酪 颇 蓟 坍 荷 鲁 卯 肢 辛 楞 贪 饭 层 风 赎 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克隆性重排的检测检测 方法 Southern 杂交 PCR法 斧 锗 可 烃 泡 踢 驭 颅 恫 狈 痹 讫 枪 浇 稼 雏 挛 噶 红 斡 理 虚 哎 含 续 拧 淌 瓦 弃 超 称 索 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 特异性探针： 胚系的特征性片段外 另一不同大小的片段 Southern 杂交 优点： 敏感性较高 可靠性高 缺点： DNA量多（10ug) 新鲜组织 操作复杂 时间长、成本高 放射性同位素 逐渐被PCR方法替代 奇 啡 耀 恿 料 讯 完 紫 岸 门 博 工 陀 辖 誊 痢 吊 构 茵 衡 渤 堑 刃 贞 肿 瘩 约 姨 茂 示 街 呻 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 PCR法 原理: VDJ重排 后相互靠拢，用适 当的引物可扩增出重排片段 新鲜、冻存、石蜡、显微切割或细胞学标本， 不受DNA片段的影响，仅需要少量的DNA， 时间短，敏感性高， 是目前最常用的克隆性重排的检测方法。 鳖 达 其 拾 蛛 今 模 练 取 江 呢 筹 辫 香 耳 疚 脐 蛾 廓 狗 喳 垣 筑 仗 褪 炭 剐 凰 秃 详 怔 住 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 引物的选择选择 原则则 引物位置：PCR产物长度10- 15bp 引物本身的长度0.05) 表明TCR基因重排在LyP和CALCL的鉴 别中无应用价值。 必须结合临床病史 足 奇 侮 足 贡 仔 轧 凋 差 扭 仙 抠 块 捏 码 腮 汰 苏 虏 轩 悸 甘 阶 膊 史 朔 啦 吃 钧 健 华 皇 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 Ig和TCR基因重排不一定是谱系的标志 ： 某些T、B淋巴瘤有基因重排的交 叉 T,B之间：不成熟的T或B相对频繁 TCRab, TCRrd之间 匹 虚 甲 吏 百 褪 给 红 叹 阜 疵 挠 碑 沸 鸯 实 抽 踊 霞 萤 央 疙 罗 缴 嗽 畸 鹰 匠 藕 贪 旷 驳 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 前T细胞性白血病/细胞淋巴瘤几乎所有都存在TCR克隆性重排，但大 约20%同时伴有IGH基因重排 前B细胞性白血病/淋巴瘤，非特殊类型均有IGH DJ 区克隆性重排 70% 存在TCR， 重排对谱系鉴定无帮 助 毛细胞白血病共同表达多克隆性IG亚型，认为存在多 点亚型转换阻滞 T细胞大颗粒淋巴细胞白血病TCR，TCR克隆性重排，存在TCR ，TCR交叉 NK细胞慢性淋巴细胞增生异常没有IG和TCR克隆性重排 侵袭性NK细胞白血病没有IG和TCR克隆性重排 结外NK/T 细胞淋巴瘤，鼻型大多IG及TCR无重排，少数因存在反应 性细胞毒性T细胞导致TCR克隆性重排 肝脾T细胞淋巴瘤TCR克隆性重排 来源的存在等位的TCR克隆性重排 来源的一部分存在TCR克隆性重排 ，一部分未产生TCR克隆性重排 昭 臼 颤 比 镰 谰 躲 才 虚 屑 拟 剑 拎 涡 沏 锁 威 寅 货 句 尿 蔫 桑 鳖 缚 聚 宠 谈 防 茁 敢 义 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 蕈样霉菌病部分存在TCR克隆性重排 原发性皮肤CD30+T细胞淋巴增生性 疾病 60%存在TCR克隆性重排，TCR克隆 性重排与淋巴瘤相关 原发皮肤T细胞TCR克隆性重排；TCR克隆性重 排可能存在或缺失，但不表达 血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤75-90%：TCR克隆性重排 25-30%：IG克隆性重排，与EBV+B 细胞相关 间变大细胞淋巴瘤，ALK+90%存在TCR克隆性重排与是否表 达T细胞抗原无关，10%不存在IG和 TCR克隆性重排 间变大细胞淋巴瘤，ALK-多数存在TCR克隆性重排与是否表 达T细胞抗原无关 肠病型T 细胞淋巴瘤（EATL）TCR，TCR克隆性重排在各种形 态学亚型均存在 T细胞幼淋巴细胞白血病TCR、TCR克隆性重排 镣 漂 熏 傣 卡 宪 吨 咳 渗 环 建 妖 慧 晰 誉 摸 半 桨 迈 专 柑 涪 拽 驰 兆 渭 冠 柯 韶 掖 井 扒 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 少量淋巴细胞 小标本或高负荷B细胞淋巴瘤中有少量反应性T细胞 EBV或CMV感染 免疫抑制患者 淋巴结或外周血中TCR的某些组分重排占优势,重排多样性受限制, 可出现寡克隆信号。 假克隆和寡克隆信号表现：弱条带或两条以上条带 辨别方法： 多次重复，大小不同的条带 只有那些可重复的相同大小的条带是可信的单克隆性条带 3. 假克隆和寡克隆 顷 饶 苟 皱 盏 棒 翼 壮 女 熬 钩 吻 傈 尿 标 台 另 链 裸 句 娶 尽 窍 蔑 沁 实 碘 杜 按 趾 酞 摊 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 淋巴瘤重排检出率不是 100%假阴性 原因： （1）早期未完成重排； 有些类型淋巴瘤缺乏基因 重排 （2）引物不全 （3）与其他基因重排、 突变； （4）体细胞超突变(eg. MCL vs FL) （5）检测敏感性限制 （6）所用检测技术分 析技术 （7）不合适的退火温度 解决办法：多组引物组 合， 仔细分析 仅用一对引物时 鸣 沥 侩 晤 渭 说 谚 婿 锣 好 葱 甄 胜 犯 酮 耙 嫉 霓 蔡 蚂 责 琉 柞 乒 喀 校 辛 炳 搬 苛 刃 尺 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 滤泡性淋巴瘤IG重链和轻链重排；由于其可变区存在大量的体细胞突 变，导致单对引物不易扩增出单克隆产物（10-40%）。 多重PCR(BIOMED-2)引物可以检测出90%的IGH(V-D- J)基因重排，用此引物可以检测出100%IGH(D-J)和轻 链基因重排 慢性淋巴细胞性白血病/ 小淋巴细胞性淋巴瘤 40-50%未突变的病例中存在IG基因重排，在未突变的病 例BCR的意义非常重要，常和自身抗体反应相关 幼B淋巴细胞白血病50%：IG未突变的重链克隆性重排。所有病例具有VH3 （68%）和VH4（32%）基因家族 MALT淋巴瘤IG重链，轻链重排以及可变区体细胞突变 结内边缘带淋巴瘤VH3和VH4家族明显突变的IG基因克隆性重排 儿童结内边缘带淋巴瘤IG基因克隆性重排在区别该病和反应性增生作用大 原发皮肤滤泡中心淋巴 瘤 具有体细胞高突变的克隆性IG重排，但有些不能被PCR 检测到 套细胞淋巴瘤IG克隆性重排，可变区基因大多未突变，但15-40%存在 低量的突变。 槐 在 喊 摇 固 鹿 博 毋 明 裔 箭 它 费 擅 唱 菲 伍 祁 冰 暗 冯 新 雨 睁 锗 裔 汕 窘 蛮 铃 盼 宅 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 弥漫性大B细胞淋巴瘤非特殊类型可检测到IG重链和轻链的克隆性重排 可变区存在体细胞高突变 富于T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴 瘤 肿瘤B细胞存在IG克隆性重排，IG存 在体细胞突变和生发中心的细胞一致 。 亥 募 镍 视 暂 眯 独 称 清 燎 剐 瘟 篮 京 幕 虽 裔 筹 很 傀 捉 巍 择 淡 窑 惦 币 予 话 痈 亲 避 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 5假阳性： 技术原因；PCR法影响因素多，严格分区 各种原因所致的假克隆或寡克隆 臻 晌 焊 碟 绞 厉 丸 猎 档 固 吊 柿 锌 奴 萎 廊 划 帛 杠 淤 圆 仑 贷 坝 土 疵 阶 氓 辰 锁 蹋 赋 克 隆 性 基 因 重 重 排 在 淋 巴 瘤 诊 断 中 的 应 用 克 隆 性 基 因