基因工程菌发酵教学课件

基因工程菌发酵幽默来自智慧，恶语来自无能第八章发酵工程在现代生物技术中的应用第一节基因工程菌发酵第一节基因工程菌发酵、基因工程基本知识●基因工程(geneticengineering)的定义基因工程是在分子水平上进行的遗传操作,指将一种或多种生物体(供体)的基因或基因组提取出来.或者人工合成基因,按照人们的愿望,进行严密的设计,经过体外加工重组,转移到另一种生物体(受体)的细胞内,使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。又称重组DNA技术●因此,供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件工程菌的应用1、基因药物例如,红细胞生成素、胰岛素、干扰素、乙肝疫苗、生长激素和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子等。、其它发酵产品例如酶制剂、氨基酸(苏氨酸、色氨酸)抗生素等。Eukaryoticchromotransformationiorvirainfectvector◎cleavagewithrestrictioncellproparationledonuclense,separationoffragmentaDNAligaseoS基因工程的基本步骤文库{基因组文库cDNA文库目的基因获得{合成PCR表达载体构建{原核:包涵体,分泌型质粒(plasmid)真核:穿梭质粒载体粘粒(cosmid)λ噬菌体(phage)重组子的形成(菌:氯化钙;电穿孔基因的导入了细胞:磷酸钙:脂质体;电穿孔;微注射;V动物:微注射;电穿孔;精子;ESC;RTV核酸鉴定:PCR;Southernandnorthernblot鉴定蛋白鉴定:SDS;HPLC;Westernblot功能检测:机体生理生化功能、性状的改变。(一)载体载体(vector)是由在细胞中能够自主复制的DNA分子构成的一种遗传成分,通过实验手段可使其它的DNA片段连接在它的上面,而进行复制。作为基因工程的载体,必须具备以下几个性能1、能独立于染色体而进行自主复制并且是高效的复制。2、要有尽可能多种限制酶的切割位点,但每一种限制酶又要最少的切割位点(多克隆位点multiplecloningsites,MCS)3、有适合的标记(抗药性基因),易于选择其他条件分子較小,可携带比较大的DNA片段。有时还要求戴体要能启动外娠基因进行转录及表达,弄且尽可能是高效的表达。从安全角度考虑,要求载体不能随便转移,仅隈于在某些实验宣内特殊菌种内才可复制等等载体的种类和特征受体细胞结构插入片断举例质粒ecoli状pC18/19,T-载体λ噬菌体COlT∧欧t系列丝状噬菌体及噬菌粒环状M3p系列粘粒载体Eco35-45kbpJB8,C2RB,coslEMBLBAC(Bacterial300kbArtificialChromosome)E状Pe1BAC系列rtificialchromosomeE100-2000kbPCYPAC1YAC(YeastArtificiachromosome酵母细胞线性染色体100-2000kbMACMammaliantificialChromosome)哺乳类细胞线性染色体〉1000kb病毒载体动物细胞环40载体,昆虫杆状病毒载体穿梭载体环状pSW3质粒,PBW,和细菌Ti质粒(二)载体DNA与外源基因片段的连接TTTGAA-TTCTTTTTTGAA-T-T-CC-T-T-A-A-G-LLC-T-T-A-A-G⊥⊥⊥CleavagewithECoRICleavagewithEcoRI黏性末端只分子之间的连接AA-T-TCTTT⊥C-T-T-A-AgmentswithplementarytailsAnnealingallowsrecombina千T下A-A-T-CTIDNAmoleculestoformbyC-T-T-A⊥⊥⊥hetwostrandsarenotcovalebondedasindicatedbycircledgalTTG-AATTCTTTDNAligasesealsthegaps,covalentlybondingthe51、天下之事常成于困约，而败于奢靡。——陆游

52、生命不等于是呼吸，生命