食品添加剂的测定-甜味剂的测定之三氯蔗糖含量的测定

三氯蔗糖含量的测定

技能点：标准溶液的配制三氯蔗糖标准贮备溶液的配制二三氯蔗糖标准中间液的配制三三氯蔗糖标准工作液的配制四目录仪器准备一仪器准备一仪器规格仪器规格电子天平0.0001g容量瓶10mL、25mL、50mL冰箱0℃~5℃刻度移液管1mL、5mL、10mL移液枪烧杯100mL玻璃棒洗瓶三氯蔗糖标准贮备溶液的配制（10.0mg/mL）二1.溶液配制2.贮存1.溶液配制三氯蔗糖含量的测定准确称取三氯蔗糖0.25g（精确到0.0001g）于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。0.25g三氯蔗糖定容至25mL一级水2.贮存三氯蔗糖含量的测定其中三氯蔗糖浓度为10.0mg/mL。4℃三氯蔗糖标准贮备液（10.0mg/mL）三氯蔗糖贮备液4℃贮存，保存期为6个月。三氯蔗糖标准中间液的配制（1.00mg/mL）三准确吸取三氯蔗糖标准贮备液5.00mL于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。4℃定容至50mL贮备液三氯蔗糖标准中间液（1.00mg/mL）吸取5.00mL中间液4℃贮存，保存期为3个月。三氯蔗糖标准工作液的配制四0.0500mg/mL0.0200mg/mL0.200mg/mL0.100mg/mL0.400mg/mL分别吸取三氯蔗糖标准中间液0.200mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL，用水定容至10mL。三氯蔗糖含量的测定

技能点：测定原理与试剂配制测定原理一适用范围二试剂配制三目录测定原理试样中三氯蔗糖用甲醇水溶液提取，除蛋白、脂肪，经固相萃取柱净化、富集后用高效液相色谱仪、反相C18色谱柱分离，蒸发光散射检测器或示差检测器检测，根据保留时间定性，以峰面积定量。一适用范围1.本法适用于食品中三氯蔗糖的测定。2.测定依据：GB22255-2014。二试剂配制1.试剂2.仪器准备3.试剂配制4.标准品三1.试剂（除另有说明，所用试剂均为分析纯）三氯蔗糖含量的测定（1）甲醇（CH3OH）。（2）水：GB/T6682规定的一级水。（3）乙腈（CH3CN）：色谱纯。（4）正己烷（C6H14）。（5）乙酸锌[Zn（CH3COO）2·2H2O]。（6）亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。（7）中性氧化铝（100目~200目）。仪器规格仪器规格电子天平0.001g量筒100mL刻度移液管5mL洗瓶容量瓶100mL、1000mL玻璃棒烧杯250mL试剂瓶2.仪器准备三氯蔗糖含量的测定（1）乙酸锌溶液（219g/L）：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解至100mL。3.试剂配制：乙酸锌溶液（219g/L）三氯蔗糖含量的测定21.9g乙酸锌一级水定容至100mL乙酸锌溶液219g/L3mL乙酸（2）亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL。3.试剂配制：亚铁氰化钾溶液（106g/L）三氯蔗糖含量的测定一级水106g亚铁氰化钾106g亚铁氰化钾一级水定容至1000mL亚铁氰化钾溶(106g/L）（3）甲醇水溶液（75＋25）：量取甲醇75mL，加水25mL，混匀。3.试剂配制：甲醇水溶液三氯蔗糖含量的测定25mL水75mL甲醇甲醇水溶液（4）乙腈水溶液（11＋89）：量取乙腈11mL，加水89mL，混匀。3.试剂配制：乙腈水溶液三氯蔗糖含量的测定89mL水11mL甲醇乙腈水溶液三氯蔗糖标准品（C12H19C13O8）：CAS编号56038-13-2，纯度≥99.0%。4.标准品三氯蔗糖含量的测定三氯蔗糖含量的测定

技能点：试样溶液的测定仪器准备一试样制备二仪器参考条件三标准曲线的制作四试样溶液的测定五目录仪器准备一仪器规格仪器规格高效液相色谱仪超声波清洗仪工作频率35kHz电子天平0.001g离心机≥3000r/min≥10000r/min恒温水浴锅100℃±1℃涡旋振荡器水性微孔滤膜0.45μm具塞离心管15mL、50mL容量瓶50mL刻度移液管1mL、2mL、5mL分液漏斗150mL蒸发皿试样制备二1.含蛋白脂肪试样2.酱及酱制品、醋、酱油3.含酒精的试样（发酵酒、配制酒）4.饮料5.风味发酵乳、奶茶1.含蛋白脂肪试样三氯蔗糖含量的测定称取（精确到0.001g）粉碎均匀固体1g~2g，液体试样1g~5g，置于50mL离心管中，加入5mL水，涡旋振荡3min后加入15mL甲醇，振荡30s，超声波提取20min，3000r/min离心10min，上清液移入50mL离心管。沉淀物加入5.0mL甲醇水溶液（75＋25），玻棒搅匀后涡旋振荡30s，3000r/min离心10min，重复提取2次，上清液合并于150mL分液漏斗中。150mL分液漏斗内，加入30mL正己烷，振摇2min，静置分层，20min后，下层水相移置于50mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当蒸发皿中液体在1mL左右时用9mL水分三次冲洗蒸发皿，冲洗液合并移置于15mL离心管中，超声波处理5min，3000r/min离心10min。取全部上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液体流速不超过每秒1滴，柱上液面为2mm左右时加入1mL水，继续保持液体流速为每秒1滴，到柱中液体完全排出后，用3mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。洗脱液置于50mL蒸发皿内，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙腈水溶液（11＋89）溶解（如有浑浊，10000r/min离心5min），溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。取全部上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液体流速不超过每秒1滴，柱上液面为2mm左右时加入1mL水，继续保持液体流速为每秒1滴，到柱中液体完全排出后，用3mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。洗脱液置于50mL蒸发皿内，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙腈水溶液（11＋89）溶解（如有浑浊，10000r/min离心5min），溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。2.酱及酱制品、醋、酱油三氯蔗糖含量的测定称取（精确到0.001g）混匀后试样2g，置于50mL离心管中，加入1.0g中性氧化铝，加入3mL水，涡旋振荡3min后加入15mL甲醇，振荡30s，超声波提取20min，3000r/min离心10min，上清液移入50mL离心管。沉淀物加入5.0mL甲醇水溶液（75＋25），玻棒搅匀后涡旋振荡30s，3000r/min离心10min，重复提取2次，上清液合并于150mL分液漏斗中。150mL分液漏斗内，加入30mL正己烷，振摇2min，静置分层，20min后，下层水相移置于50mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当蒸发皿中液体在1mL左右时用9mL水分三次冲洗蒸发皿，冲洗液合并移置于15mL离心管中，超声波处理5min，3000r/min离心10min。3.含酒精的试样（发酵酒、配制酒）三氯蔗糖含量的测定准确称样5g（0.001g）沸水浴蒸干残渣用1.00mL乙腈溶液（11＋89）溶解溶液过0.45μm滤膜称取混匀后试样5g（精确到0.001g），置于50mL蒸发皿中，于沸水浴中蒸干，残渣用1.00mL乙腈水溶液（11＋89）溶解，溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。4.饮料三氯蔗糖含量的测定称取混匀后试样5g（精确到0.001g），置于15mL离心管中，加入5mL水，涡旋振荡30s，3000r/min离心10min。取全部上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液体流速不超过每秒1滴，柱上液面为2mm左右时加入1mL水，继续保持液体流速为每秒1滴，到柱中液体完全排出后，用3mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。洗脱液置于50mL蒸发皿内，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙腈水溶液（11＋89）溶解（如有浑浊，10000r/min离心5min），溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。取全部上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液体流速不超过每秒1滴，柱上液面为2mm左右时加入1mL水，继续保持液体流速为每秒1滴，到柱中液体完全排出后，用3mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。洗脱液置于50mL蒸发皿内，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙腈水溶液（11＋89）溶解（如有浑浊，10000r/min离心5min），溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。5.风味发酵乳、奶茶三氯蔗糖含量的测定称取混匀后试样1g~5g（精确到0.001g）置于50mL离心管中，加入5mL水，涡旋振荡3min后加入15mL甲醇、0.5mL乙酸锌溶液、0.5mL亚铁氰化钾溶液，继续振荡30s，超声波提取20min，3000r/min离心10min，上清液移入50mL离心管。沉淀物加入5.0mL甲醇水溶液（75＋25），玻棒搅匀后涡旋振荡30s，3000r/min离心10min，重复提取2次，上清液合并于150mL分液漏斗中。150mL分液漏斗内，加入30mL正己烷，振摇2min，静置分层，20min后，下层水相移置于50mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当蒸发皿中液体在1mL左右时用9mL水分三次冲洗蒸发皿，冲洗液合并移置于15mL离心管中，超声波处理5min，3000r/min离心10min。仪器参考条件色谱柱：C18柱（4.6mm×150mm，5μm）或性能相当者。流动相：水＋乙腈＝89＋11。流速：1.0mL/min。柱温：35℃。示差检测器条件：检测池温度35℃，灵敏度16。蒸发光散射检测器条件：按不同品牌蒸发光散射检测器在高水相流动相条件下的要求设置。进样量：20.0μL。三标准曲线的制作1.示差检测器2.蒸发光散射检测器四1.示差检测器三氯蔗糖含量的测定取三氯蔗糖标准工作溶液分别进样20.0μL，在上述色谱条件下测定峰面积-三氯蔗糖（mg/mL）标准曲线，曲线方程依示差检测原理，见式：y=ax＋b式中：

y——峰面积；

a、b——与检测池温度、流动相性质等实验条件有关的常数；

x——三氯蔗糖的浓度，mg/mL。2.蒸发光散射检测器三氯蔗糖含量的测定取三氯蔗糖标准工作溶液分别进样20.0μL，在给定的色谱条件下测定峰面积，然后做峰面积-三氯蔗糖（mg/mL）标准曲线，曲线方程依蒸发光散射检测原理，见式：y=bxa式中：

y——峰面积；

a、b——与蒸发室温度、流动相性质等实验条件有关的常数；