肠道菌群代谢物与阿尔茨海默病生物标志物

肠道菌群代谢物与阿尔茨海默病生物标志物演讲人01肠道菌群代谢物与阿尔茨海默病生物标志物肠道菌群代谢物与阿尔茨海默病生物标志物一、引言：阿尔茨海默病的公共卫生负担与肠道菌群-肠-脑轴的研究背景021阿尔茨海默病的病理特征与临床挑战1阿尔茨海默病的病理特征与临床挑战阿尔茨海默病（Alzheimer'sdisease,AD）是老年人群中最常见的神经退行性疾病，临床以进行性认知功能障碍、记忆力减退和行为异常为主要特征，其病理核心标志物包括β-淀粉样蛋白（Aβ）异常沉积形成的老年斑、tau蛋白过度磷酸化导致的神经原纤维缠结，以及神经元丢失和神经炎症反应。据世界卫生组织（WHO）2021年数据，全球现有AD患者超过5000万，预计2050年将达1.52亿，给家庭和社会带来沉重的照护与经济负担。然而，当前AD的临床诊断仍主要依赖认知量表评估和传统生物标志物（如脑脊液Aβ42、tau蛋白，或Amyloid-PET影像），存在侵入性强、成本高昂、早期诊断敏感度不足等局限。更令人忧心的是，当临床症状出现时，AD病理改变已持续数十年，错失了最佳干预窗口。因此，寻找能够反映疾病早期变化、无创且特异的新型生物标志物，已成为AD研究领域的迫切需求。032肠道菌群作为“第二基因组”的潜在作用2肠道菌群作为“第二基因组”的潜在作用近年来，随着宏基因组学、代谢组学等技术的发展，肠道菌群——这一寄居在人体消化道的“微生物器官”——逐渐被证实与多种疾病密切相关。人体肠道内栖息着约100万亿个微生物，其基因数量是宿主基因的100倍以上，被称为“第二基因组”。这些菌群通过参与营养物质代谢、肠道屏障维持、免疫调节等生理过程，深刻影响宿主健康。值得注意的是，肠道菌群与中枢神经系统（CNS）之间存在双向沟通的“肠-脑轴”（gut-brainaxis），可通过神经、内分泌、免疫及代谢等多种途径调控大脑功能。这一发现为理解神经退行性疾病的发病机制提供了全新视角，也为AD的生物标志物研究开辟了新方向。043肠道菌群代谢物：连接肠道与大脑的分子桥梁3肠道菌群代谢物：连接肠道与大脑的分子桥梁肠道菌群通过其独特的代谢功能，将膳食纤维、蛋白质、胆汁酸等宿主来源的物质转化为多种小分子代谢物，这些代谢物既是菌群生命活动的产物，也是影响宿主生理功能的关键信号分子。例如，短链脂肪酸（SCFAs）、色氨酸代谢物、胆汁酸等，不仅能够通过肠道屏障进入血液循环，还能跨越血脑屏障（BBB）直接作用于神经细胞，或通过迷走神经、免疫细胞等间接影响大脑。已有研究表明，AD患者肠道菌群结构发生显著改变，伴随多种代谢物水平异常；而菌群代谢物的变化早于认知功能障碍的出现，提示其可能作为AD早期诊断的潜在生物标志物。054本文的研究目标与框架4本文的研究目标与框架本文旨在系统阐述肠道菌群代谢物与AD生物标志物的研究进展，从代谢物的种类与功能、AD传统生物标志物的局限、菌群代谢物影响AD病理的机制，到特定代谢物作为生物标志物的证据与挑战，全面探讨“肠道菌群-代谢物-脑轴”在AD发生发展中的作用。通过整合基础研究与临床数据，本文将分析当前研究的瓶颈与未来方向，为AD的早期诊断、风险预测及精准干预提供理论依据，同时也为相关领域的科研工作者和临床医生提供参考。肠道菌群代谢物的种类、来源及其生物学功能2.1短链脂肪酸（SCFAs）：乙酸、丙酸、丁酸的代谢与作用短链脂肪酸是肠道菌群发酵膳食纤维的主要代谢产物，主要包括乙酸（C2）、丙酸（C3）和丁酸（C4），占总SCFAs的90%-95%。其中，乙酸主要由拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes）的某些菌属（如拟杆菌属Bacteroides、梭菌属Clostridium）产生；丙酸主要由韦荣球菌属（Veillonella）和丙酸杆菌属（Propionibacterium）合成；丁酸则主要由厌氧菌（如柔嫩梭菌Faecalibacteriumprausnitzii、罗斯氏菌Roseburia属）利用乙酸和乳酸产生。肠道菌群代谢物的种类、来源及其生物学功能SCFAs通过多种途径发挥生理作用：①作为能量底物：丁酸是结肠上皮细胞的主要能量来源，占其能量需求的70%；乙酸和丙酸可被肝脏利用，参与糖异生和胆固醇合成。②调节免疫：丁酸通过抑制组蛋白去乙酰化酶（HDAC）活性，促进调节性T细胞（Treg）分化，减轻肠道和大脑的炎症反应；丙酸可通过G蛋白偶联受体（GPR41/43）激活巨噬细胞，抑制促炎因子（如IL-6、TNF-α）释放。③维持肠道屏障：丁酸增加紧密连接蛋白（如occludin、claudin-1）表达，降低肠道通透性，减少细菌内毒素（如LPS）入血。④影响神经功能：SCFAs可跨越BBB，促进脑源性神经营养因子（BDNF）表达，调节神经递质（如5-HT、GABA）合成，抑制小胶质细胞活化，从而发挥神经保护作用。062色氨酸代谢物：犬尿氨酸、5-羟色氨酸等神经活性物质2色氨酸代谢物：犬尿氨酸、5-羟色氨酸等神经活性物质色氨酸是人体必需氨基酸，约95%的色氨酸在肝脏通过犬尿氨酸途径（KP）代谢，产生犬尿氨酸（Kyn）、3-羟基犬尿氨酸（3-HK）、喹啉酸（QA）等；仅5%通过5-羟色胺途径（5-HTP）生成5-羟色胺（5-HT，血清素）和褪黑素。肠道菌群（如双歧杆菌Bifidobacterium、乳杆菌Lactobacillus）可通过分泌色氨酸酶、代谢芳香族氨基酸等途径，影响色氨酸的代谢分流。色氨酸代谢物在神经系统中扮演重要角色：5-HT是调节情绪、睡眠、食欲的关键神经递质，其水平降低与抑郁、焦虑等精神疾病相关；犬尿氨酸代谢产物中的QA是NMDA受体激动剂，过量可导致神经元兴奋性毒性；而3-HK和QA的积累可诱导氧化应激，促进神经炎症。值得注意的是，AD患者脑内和血液中犬尿氨酸/色氨酸（Kyn/Trp）比值显著升高，提示色氨酸代谢通路向犬尿氨酸途径倾斜，可能与神经退行性变有关。073胆汁酸代谢物：初级与次级胆汁酸的肠肝循环与神经调节3胆汁酸代谢物：初级与次级胆汁酸的肠肝循环与神经调节胆汁酸由肝脏胆固醇合成，初级胆汁酸包括胆酸（CA）和鹅脱氧胆酸（CDCA），在肠道中经菌群（如梭菌属Clostridium、拟杆菌属Bacteroides）作用转化为次级胆汁酸（如脱氧胆酸DCA、石胆酸LCA）。胆汁酸通过肠肝循环维持代谢稳态，同时也是重要的信号分子，通过激活法尼醇X受体（FXR）和G蛋白偶联胆汁酸受体（TGR5）调控葡萄糖、脂质代谢和炎症反应。近年研究发现，胆汁酸可直接或间接影响大脑功能：FXR在脑内海马体、皮层等区域表达，其激活可抑制NF-κB信号通路，减轻神经炎症；TGR5激活后促进GLUT4转位，改善脑内能量代谢，并抑制小胶质细胞活化。此外，次级胆汁酸DCA和LCA具有神经毒性，过量可破坏BBB完整性，诱导神经元凋亡。AD患者血清中次级胆汁酸水平降低，而初级胆汁酸/次级胆汁酸比值升高，提示胆汁酸代谢紊乱可能参与AD发病。3胆汁酸代谢物：初级与次级胆汁酸的肠肝循环与神经调节2.4其他代谢物：氧化三胺、酚类化合物、γ-氨基丁酸（GABA）等除上述代谢物外，肠道菌群还产生多种影响神经功能的活性分子：①氧化三胺（TMAO）：由肠道菌群代谢胆碱、L-肉碱产生，经肝脏转化为TMAO。研究表明，TMAO可促进Aβaggregation，加剧tau磷酸化，并通过NLRP3炎症小体激活神经炎症，与AD风险正相关。②酚类化合物：如对甲酚（p-cresol）、苯酚，是肠道菌群芳香族氨基酸发酵的产物，具有抗氧化和神经毒性双重作用——低浓度可清除自由基，高浓度则抑制线粒体功能，诱导氧化应激。③γ-氨基丁酸（GABA）：由肠道乳酸菌（如Lactobacillusbrevis、Bifidobacteriumdentium）通过谷氨酸脱羧酶（GAD）合成，是中枢神经系统主要抑制性神经递质，可调节神经元兴奋性，改善认知功能。085肠道菌群代谢物的动态平衡及其影响因素5肠道菌群代谢物的动态平衡及其影响因素肠道菌群代谢物的水平受多种因素调控：饮食结构（高纤维饮食增加SCFAs，高脂肪饮食升高TMAO）、年龄（老年菌群多样性降低，SCFAs生成减少）、药物（抗生素破坏菌群结构，改变代谢物谱）、遗传背景（如APOEε4基因可通过影响菌群组成间接调控代谢物）等。维持代谢物动态平衡对宿主健康至关重要，而失衡则可能成为包括AD在内的多种疾病的诱因。阿尔茨海默病的传统生物标志物及其局限性3.1脑脊液生物标志物：Aβ42、Aβ40、p-tau、t-tau的临床意义脑脊液（CSF）生物标志物是目前AD诊断的“金标准”之一，主要包括Aβ42、Aβ40、总tau蛋白（t-tau）和磷酸化tau蛋白（p-tau）。AD患者由于Aβ产生增多或清除减少，CSF中Aβ42水平显著降低（反映Aβ沉积）；而tau蛋白过度磷酸化后释放至CSF，导致t-tau和p-tau（如p-tau181、p-tau217）水平升高。2021年，美国国立衰老研究所和阿尔茨海默协会（NIA-AA）更新AD生物标志物研究框架，将“Aβ42/Aβ40比值降低+p-tau升高”作为AD病理诊断的核心标准。阿尔茨海默病的传统生物标志物及其局限性然而，CSF检测存在明显局限：①侵入性：腰椎穿刺有创，患者接受度低，尤其对老年人群和抗凝治疗者存在风险；②异质性：不同实验室检测方法（如ELISA、SIMOA）和试剂差异导致结果可比性差；③动态变化：CSF标志物水平在AD不同阶段波动，如轻度认知障碍（MCI）阶段Aβ42已降低，但p-tau可能仅在痴呆期显著升高，影响早期诊断敏感度。092血液生物标志物：从Aβ片段到磷酸化tau蛋白的进展2血液生物标志物：从Aβ片段到磷酸化tau蛋白的进展为克服CSF检测的侵入性，血液生物标志物成为研究热点。近年来，高灵敏度单分子阵列技术（SIMOA）的应用使血液AD标志物检测成为可能：①Aβ亚型：血液Aβ42/40比值与CSF及脑内Aβ沉积显著相关，且在MCI阶段即可出现异常；②磷酸化tau蛋白：p-tau181、p-tau217等在AD患者血液中显著升高，其诊断效能接近CSF标志物，且能区分AD与其他神经退行性疾病（如路易体痴呆、额颞叶痴呆）；③神经丝轻链（NfL）：反映神经元损伤，其水平与AD认知下降速度相关，但特异性较低。尽管血液标志物无创、易推广，但仍存在不足：①浓度低：血液中tau蛋白、Aβ浓度仅为CSF的1/500至1/1000，对检测技术要求极高；②干扰因素：肾脏功能、外周血细胞裂解等可影响检测结果；③疾病特异性：部分标志物（如NfL）在多种神经系统疾病中均升高，难以单独用于AD鉴别诊断。2血液生物标志物：从Aβ片段到磷酸化tau蛋白的进展3.3影像学生物标志物：结构MRI、FDG-PET、Amyloid-PET的应用影像学标志物通过无创手段观察AD病理改变：①结构MRI：显示海马体和内嗅皮层萎缩，是AD诊断的常规手段，但特异性不足（其他类型痴呆也可出现相似改变）；②氟代脱氧葡萄糖PET（FDG-PET）：反映脑葡萄糖代谢降低，AD患者典型表现为后部皮层代谢减低，早期诊断敏感度较高，但价格昂贵；③淀粉样蛋白PET（Amyloid-PET）：如匹兹堡化合物B（PiB）标记，可直接显示脑内Aβ沉积，是AD病理诊断的重要工具，但辐射暴露和成本限制了其广泛应用。影像学标志物的局限性同样显著：成本高、设备可及性差（尤其Amyloid-PET仅在三甲医院配备），且对早期病理变化（如Aβ寡聚体形成）不敏感，难以满足大规模筛查需求。2血液生物标志物：从Aβ片段到磷酸化tau蛋白的进展3.4传统生物标志物的局限性：侵入性、成本、早期诊断敏感度不足综合来看，现有AD生物标志物虽在诊断中发挥重要作用，但仍面临共同挑战：侵入性（CSF、PET）、成本高昂（PET、SIMOA检测）、早期诊断敏感度不足（血液标志物在MCI阶段阳性率约60%-70%）、特异性有限（需结合认知评估和多项标志物联合判断）。因此，寻找能够反映疾病早期变化、无创且特异的新型生物标志物，已成为AD研究的突破口。肠道菌群代谢物作为“肠-脑轴”的关键介质，其水平变化与AD病理密切相关，且可通过粪便、血液、尿液等无创样本检测，展现出独特的优势。肠道菌群代谢物影响AD病理的机制探索4.1调节Aβ代谢与沉积：菌群代谢物对BACE1、NEP等酶活性的影响Aβ的产生与清除失衡是AD发病的核心环节。β-分泌酶（BACE1）和γ-分泌酶（γ-secretase）切割淀粉样前体蛋白（APP）生成Aβ，而Aβ降解酶（如中性内肽酶NEP、胰岛素降解酶IDE）则清除Aβ。肠道菌群代谢物可通过多种酶活性影响Aβ代谢：-SCFAs：丁酸可通过抑制HDAC活性，上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达，促进IDE合成，加速Aβ降解；同时，丁酸减少BACE1转录，降低Aβ产生。-色氨酸代谢物：5-HT可通过激活5-HT1A受体，抑制γ-secretase活性，减少Aβ生成；而犬尿氨酸代谢产物QA则通过NMDA受体过度激活，增加BACE1表达，促进Aβ沉积。肠道菌群代谢物影响AD病理的机制探索-胆汁酸：次级胆汁酸DCA可通过FXR受体，下调APP转录，减少Aβ前体产生；而初级胆汁酸CA则可能通过激活TGR5，增强小胶质细胞对Aβ的吞噬清除。4.2抑制tau蛋白过度磷酸化：通过AMPK/mTOR、GSK-3β信号通路tau蛋白过度磷酸化形成神经原纤维缠结，是AD另一关键病理特征。肠道菌群代谢物可通过调控关键信号通路抑制tau磷酸化：-SCFAs：丁酸激活AMPK信号，抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活性，减少tau蛋白合成；同时，丁酸通过上调PPARγ，抑制糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）活性——GSK-3β是tau蛋白主要激酶之一，其过度激活可导致tau过度磷酸化。肠道菌群代谢物影响AD病理的机制探索-TMAO：研究表明，TMAO可激活蛋白激酶C（PKC）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号，增加tau蛋白磷酸化水平，而降低TMAO水平（如通过饮食干预）则可逆转这一效应。-GABA：作为GABA受体激动剂，GABA可通过抑制钙调素依赖性蛋白激酶II（CaMKII）活性，减少tau蛋白磷酸化，保护神经元功能。4.3减轻神经炎症：小胶质细胞活化、炎症因子（IL-1β、TNF-α）的调控神经炎症是AD病程中的持续性反应，小胶质细胞过度活化释放促炎因子（如IL-1β、TNF-α、IL-6），加剧神经元损伤。肠道菌群代谢物是调节神经炎症的重要介质：-SCFAs：丁酸和丙酸通过GPR43受体抑制NF-κB信号通路，减少小胶质细胞释放IL-1β和TNF-α；同时，丁酸促进Treg细胞分化，增加抗炎因子IL-10分泌，缓解神经炎症。肠道菌群代谢物影响AD病理的机制探索-色氨酸代谢物：犬尿氨酸可通过芳香烃受体（AhR）激活小胶质细胞，促炎效应；而5-HT则通过抑制NLRP3炎症小体组装，减少IL-1β成熟和释放，发挥抗炎作用。-胆汁酸：FXR激活后抑制TLR4/NF-κB信号，降低小胶质细胞活化程度；TGR5激动剂则可通过环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）通路，抑制炎症因子转录。4.4维持血脑屏障完整性：紧密连接蛋白表达与肠道屏障-血脑屏障串扰血脑屏障（BBB）破坏是AD早期事件，可导致Aβ和炎症因子入脑，加速病理进展。肠道菌群代谢物通过“肠-轴-脑”串扰维持BBB完整性：肠道菌群代谢物影响AD病理的机制探索-SCFAs：丁酸增加脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白（如claudin-5、occludin）表达，降低BBB通透性；同时，丁酸促进肠道杯状细胞分泌黏液，增强肠道屏障功能，减少LPS等细菌产物入血，间接减轻BBB损伤。-GABA：通过GABA受体调节内皮细胞钙离子浓度，稳定细胞骨架，维持BBB结构完整；此外，GABA还可抑制基质金属蛋白酶（MMPs）活性，减少BBB基底膜降解。-氧化三胺：TMAO通过激活PKC-β信号，增加内皮细胞间黏附分子（ICAM-1）表达，破坏BBB完整性，而降低TMAO水平则可逆转这一效应。123肠道菌群代谢物影响AD病理的机制探索4.5影响突触可塑性与神经递质：BDNF、5-HT、GABA等的作用突触丢失和神经递质紊乱是AD认知功能障碍的直接原因。肠道菌群代谢物通过调节突触相关蛋白和神经递质合成影响神经可塑性：-SCFAs：丁酸促进BDNF表达，激活PI3K/Akt信号通路，增强突触蛋白（如PSD-95、synaptophysin）合成，改善突触可塑性；同时，丁酸增加GABA能神经元数量，调节神经递质平衡。-色氨酸代谢物：5-HT作为“快乐神经递质”，其水平降低与抑郁、焦虑相关，而肠道菌群（如乳杆菌）通过色氨酸羟化酶（TPH）增加5-HT合成，改善情绪和认知功能。-胆汁酸：石胆酸（LCA）可通过FXR受体，增强NMDA受体功能，促进长时程增强（LTP），改善学习记忆能力。106肠道屏障通透性（“肠漏”）与系统性炎症的介导作用6肠道屏障通透性（“肠漏”）与系统性炎症的介导作用“肠漏”（intestinalpermeability）是指肠道屏障功能受损，导致细菌及其代谢产物（如LPS、细菌DNA）入血，引发系统性炎症。在AD患者中，肠道菌群失调（如产SCFAs菌减少，革兰阴性菌增多）可导致“肠漏”，LPS通过TLR4激活单核巨噬细胞，释放IL-1β、TNF-α等炎症因子，这些因子可通过血液循环跨越BBB或通过迷走神经传入大脑，激活小胶质细胞，形成“外周炎症-中枢炎症”恶性循环，加速AD病理进展。此外，LPS还可直接促进Aβ产生和tau磷酸化，进一步加重神经退行性变。111短链脂肪酸：SCFAs水平与AD认知功能下降的相关性1短链脂肪酸：SCFAs水平与AD认知功能下降的相关性多项研究表明，AD患者肠道中产SCFAs菌（如柔嫩梭菌、罗斯氏菌）丰度显著降低，伴随粪便和血液中SCFAs水平下降。在一项纳入120例AD患者和100例健康对照的前瞻性研究中，AD患者粪便丁酸和丙酸水平较对照组降低30%-40%，且丁酸水平与MMSE评分呈正相关（r=0.52，P<0.001）；另一项研究发现，血液中丁酸水平每降低10μmol/L，AD风险增加1.3倍。机制研究显示，SCFAs水平下降可通过减少BDNF表达、增加神经炎症，加速认知功能衰退。122色氨酸代谢物：犬尿氨酸通路异常与神经退行性变2色氨酸代谢物：犬尿氨酸通路异常与神经退行性变色氨酸代谢紊乱是AD患者菌群代谢物谱的显著特征。AD患者血液和脑脊液中犬尿氨酸/色氨酸（Kyn/Trp）比值较健康人升高50%-70%，而5-羟色胺/色氨酸（5-HT/Trp）比值降低。在一项队列研究中，基线Kyn/Trp比值最高的老年人，3年内进展为MCI的风险增加2.1倍（HR=2.1，95%CI:1.3-3.4）。此外，喹啉酸（QA）水平升高与AD患者认知评分下降速度显著相关（r=-0.48，P<0.01），可能是通过NMDA受体过度激活和氧化应激损伤神经元。133胆汁酸：石胆酸、脱氧胆酸等次级胆汁酸的潜在标志物价值3胆汁酸：石胆酸、脱氧胆酸等次级胆汁酸的潜在标志物价值AD患者胆汁酸代谢谱发生显著改变：次级胆汁酸（如DCA、LCA）水平降低，而初级胆汁酸（如CA、CDCA）水平升高。一项针对200例AD患者和150例对照的代谢组学研究显示，AD患者粪便中石胆酸（LCA）水平较对照组降低45%，且LCA水平与CSFAβ42水平正相关（r=0.41，P<0.001）；血液中脱氧胆酸（DCA）水平每降低20μmol/L，AD风险增加1.5倍。机制研究表明，次级胆汁酸减少可通过FXR/TGR5信号通路减弱，导致神经炎症和Aβ沉积增加。5.4其他代谢物：氧化三胺、苯乙酰谷氨酰胺（PAGln）与AD风险-TMAO：AD患者血液TMAO水平较健康人升高2-3倍，且与认知功能呈负相关（r=-0.38，P<0.01）。一项纳入15项观察性研究的Meta分析显示，TMAO水平最高四分位数人群的AD风险是最低四分位数的1.8倍（RR=1.8，95%CI:1.4-2.3）。3胆汁酸：石胆酸、脱氧胆酸等次级胆汁酸的潜在标志物价值-苯乙酰谷氨酰胺（PAGln）：是肠道菌群代谢苯丙氨酸产生的化合物，AD患者血液PAGln水平升高30%-50%，且与CSFp-tau水平正相关（r=0.47，P<0.001）。PAGln可通过抑制线粒体复合物I活性，诱导氧化应激，促进神经元损伤。145多代谢物联合模型：提高AD早期诊断与分型的准确性5多代谢物联合模型：提高AD早期诊断与分型的准确性单一代谢物诊断AD的敏感度和有限，而多代谢物联合模型可显著提升效能。例如，一项研究联合粪便SCFAs（丁酸、丙酸）、色氨酸代谢物（Kyn/Trp比值）和胆汁酸（LCA水平）构建诊断模型，其区分AD患者与健康对照的AUC达0.89，区分MCI与AD的AUC达0.82；另一项研究纳入血液TMAO、PAGln和5-HT，构建的预测模型在AD早期诊断中敏感度达85%，特异性达78%。这些模型结合了“肠-脑轴”多条通路的信息，更全面反映AD病理状态。156前瞻性队列研究：代谢物变化早于临床症状的证据6前瞻性队列研究：代谢物变化早于临床症状的证据最令人振奋的是，多项前瞻性队列研究证实，肠道菌群代谢物变化早于AD临床症状出现。一项针对1000名老年人的队列研究（平均随访5年）发现，基线血液Kyn/Trp比值升高和丁酸水平降低的受试者，即使基线认知功能正常，进展为MCI的风险也分别增加2.2倍和1.8倍；另一项研究显示，在CSFAβ42开始降低的前2-3年，粪便SCFAs水平已出现显著异常。这些结果提示，肠道菌群代谢物可能是AD超早期诊断的“窗口期”标志物。161代谢物检测技术的标准化与质控难题1代谢物检测技术的标准化与质控难题目前，肠道菌群代谢物检测方法（如GC-MS、LC-MS/MS）在不同实验室间存在较大差异，包括样本前处理（粪便/血液保存、提取方法）、色谱条件、质谱参数等，导致结果可比性差。此外，代谢物浓度受饮食、药物、昼夜节律等因素影响较大，缺乏标准化的质控体系。未来需建立统一的检测流程和参考标准，开发高通量、自动化的检测平台，提高结果可靠性。172样本异质性：饮食、年龄、共病等因素的干扰2样本异质性：饮食、年龄、共病等因素的干扰AD患者肠道菌群代谢物谱受多种因素影响：高纤维饮食可增加SCFAs水平，掩盖疾病相关变化；老年人菌群多样性降低，代谢物基础水平低；糖尿病、高血压等共病及降压药、降糖药等药物均可干扰代谢物谱。因此，未来研究需严格匹配对照组，控制混杂因素，并通过多中心大样本队列验证代谢物标志物的普适性。183因果关系验证：动物模型与人群研究的整合3因果关系验证：动物模型与人群研究的整合现有研究多基于相关性分析，难以确定菌群代谢物与AD的因果