环境监测微生物知识培训试题有答案

环境监测微生物知识培训试题有答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.以下哪类微生物常作为环境水体粪便污染的指示菌？A.金黄色葡萄球菌B.硝化细菌C.总大肠菌群D.枯草芽孢杆菌2.采用滤膜法检测水中总大肠菌群时，培养基应选择：A.营养琼脂B.乳糖胆盐发酵培养基C.m-Endo培养基D.血琼脂培养基3.环境空气微生物采样时，撞击式采样器的工作原理是：A.利用离心力将微生物颗粒沉降至培养基B.通过滤膜过滤截留空气中的微生物C.依靠气流冲击使微生物颗粒撞击到固体培养基表面D.通过静电吸附捕获微生物4.测定土壤中微生物生物量碳时，常用的方法是：A.平板计数法B.氯仿熏蒸提取法C.MPN法（最大可能数法）D.荧光原位杂交（FISH）5.以下关于环境微生物检测中无菌操作的描述，错误的是：A.采样瓶使用前需经121℃高压灭菌30分钟B.操作台面需用75%乙醇擦拭消毒C.移液时移液器枪头可重复使用，只需避免接触非无菌区域D.培养基倾注平皿时需在超净工作台内完成6.根据《地表水环境质量标准》（GB3838-2002），Ⅲ类水域中总大肠菌群的限值（MPN/L或CFU/L）为：A.≤1000B.≤10000C.≤20000D.≤50007.检测废水中粪大肠菌群时，最适培养温度是：A.25℃B.37℃C.44.5℃D.55℃8.以下哪种微生物是好氧反硝化细菌的典型代表？A.产甲烷菌B.假单胞菌C.硫酸盐还原菌D.乳酸菌9.环境空气微生物采样时，采样高度通常要求距地面：A.0.5mB.1.0mC.1.5mD.2.0m10.测定活性污泥中微生物群落结构时，最常用的分子生物学方法是：A.革兰氏染色B.16SrRNA基因测序C.显微镜直接计数D.比浊法测菌浓度11.以下关于微生物检测样品保存的描述，正确的是：A.水样中微生物检测应在采样后4小时内完成检测B.需冷冻保存的样品可直接放入-20℃冰箱C.土壤样品可在室温下保存7天D.空气微生物采样后，培养基平板可在4℃保存1周后再培养12.采用MPN法检测水中大肠菌群时，若3个稀释度（10⁻¹、10⁻²、10⁻³）的阳性管数分别为3、2、0，则MPN值为：A.9.5B.23C.110D.43013.以下哪种因素不会显著影响环境微生物检测结果的准确性？A.采样时的天气条件（如风速、湿度）B.培养基的pH值偏差C.检测人员的操作熟练程度D.实验室空调的开关状态14.环境监测中，用于评价水体自净能力的微生物指标是：A.异养菌总数B.硝化细菌数量C.硫酸盐还原菌数量D.产甲烷菌数量15.以下关于微生物检测质量控制的描述，错误的是：A.每批培养基需做空白试验B.平行样的相对偏差应≤20%C.阳性对照可使用已知浓度的标准菌株D.阴性对照出现菌落时，检测结果仍可报出二、判断题（每题1分，共10分。正确打“√”，错误打“×”）1.环境空气中微生物主要以单个菌体形式存在，很少形成菌团。（）2.检测水中细菌总数时，营养琼脂培养基的培养时间为48±2小时。（）3.土壤中放线菌的数量通常多于细菌。（）4.滤膜法检测大肠菌群时，滤膜需用无菌镊子转移至培养基表面，避免气泡。（）5.环境微生物检测中，所有水样均需在采样后加入硫代硫酸钠中和余氯。（）6.革兰氏阳性菌经染色后呈红色，阴性菌呈紫色。（）7.测定活性污泥中微生物数量时，需先将污泥样品用无菌水稀释并充分振荡分散。（）8.环境空气微生物采样时，采样流量越大，检测结果越准确。（）9.培养基高压灭菌的条件是121℃、15分钟。（）10.微生物检测实验室需设置独立的准备室、接种室和培养室。（）三、简答题（每题8分，共40分）1.简述环境监测中选择微生物指示菌的基本原则。2.对比平板计数法与MPN法在检测水中细菌总数时的优缺点。3.列举环境水样微生物检测的采样流程及关键注意事项。4.说明培养基质量控制的主要内容及判定标准。5.简述16SrRNA基因测序技术在环境微生物群落分析中的应用步骤。四、案例分析题（20分）某环境监测站对某城市河流进行微生物指标监测，采样点位于污水处理厂排水口下游500米处。检测结果显示：总大肠菌群为1.2×10⁵CFU/100mL（标准限值为≤10000CFU/100mL），粪大肠菌群未检出。经核查，采样过程符合规范，实验室检测流程无异常。问题：（1）分析总大肠菌群超标但粪大肠菌群未检出的可能原因。（10分）（2）提出下一步应采取的验证及处理措施。（10分）答案一、单项选择题1.C2.C3.C4.B5.C6.B7.C8.B9.C10.B11.A12.C13.D14.B15.D二、判断题1.×（环境空气中微生物多以菌团或与颗粒物结合形式存在）2.√（细菌总数检测通常培养48小时）3.×（土壤中细菌数量最多，其次是放线菌）4.√（滤膜转移需避免气泡影响菌落生长）5.×（仅余氯超标的水样需加硫代硫酸钠中和）6.×（革兰氏阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色）7.√（分散处理可避免菌体聚集导致计数偏差）8.×（采样流量需符合仪器要求，过大可能损伤微生物）9.√（常规培养基灭菌条件为121℃、15-20分钟）10.√（分区设置可避免交叉污染）三、简答题1.选择原则：①特异性：能明确指示特定污染类型（如粪大肠菌群指示粪便污染）；②敏感性：对环境变化或污染物反应灵敏；③稳定性：在环境中存活时间与污染源存在时间匹配，避免因存活过短或过长导致误判；④可检测性：检测方法成熟、操作简便、结果可靠；⑤代表性：能反映环境介质（水、气、土壤）的整体污染状况。2.平板计数法与MPN法对比：平板计数法：优点：直接计数活菌，结果以CFU（菌落形成单位）表示，直观；可观察菌落形态辅助鉴定；缺点：仅能培养可在该培养基上生长的微生物（约1%-10%的环境微生物）；对营养要求高的微生物易漏检；操作时间较长（需48小时培养）。MPN法：优点：适用于浓度较低或含抑制物质的水样；无需严格无菌操作（通过多管稀释降低干扰）；缺点：结果为统计学估算值（MPN），准确性低于平板计数法；无法观察菌落形态；需更多培养基和试验管。3.采样流程及注意事项：流程：①容器准备：使用经121℃高压灭菌30分钟的玻璃或塑料瓶（若测余氯需加硫代硫酸钠）；②采样位置：表层水在水面下10-20cm，深层水按分层要求；③采样操作：避免搅动底部沉积物，瓶口朝水流方向倾斜；④标识记录：标注采样时间、地点、温度、采样人；⑤保存运输：4℃冷藏，2小时内送达实验室，4小时内检测（否则需冷冻但可能影响活菌数）。注意事项：①采样前手和工具需消毒，避免人为污染；②同一断面采样时，先采微生物样，再采理化样；③若水样浑浊，需在检测前用无菌纱布过滤（滤膜法时需预处理）；④记录采样时的环境条件（如水温、天气），供结果分析参考。4.培养基质量控制内容及标准：①成分验证：检查配方是否符合标准（如pH值、营养成分含量）；②灭菌效果：灭菌后做无菌试验（37℃培养48小时无菌落生长）；③促生长能力：接种标准菌株（如大肠杆菌ATCC25922），菌落数应≥80%理论值；④选择性验证：对目标菌（如大肠菌群）应能抑制杂菌生长（如在m-Endo培养基上，非大肠菌群菌落被抑制或形态不同）；⑤存储条件：固体培养基4℃保存不超过1个月，液体培养基不超过2周（需观察是否有沉淀或变色）。5.16SrRNA基因测序应用步骤：①样品预处理：提取环境样品（如污泥、土壤）中的总DNA；②目标基因扩增：使用通用引物（如27F/1492R）扩增16SrRNA基因可变区（如V3-V4区）；③测序文库构建：对扩增产物进行纯化、定量，连接测序接头；④高通量测序：通过IlluminaMiSeq等平台进行双端测序；⑤数据分析：利用QIIME、Mothur等软件进行序列拼接、去杂、OTU（操作分类单元）聚类；⑥群落分析：计算α多样性（丰富度、均匀度）、β多样性（不同样品间差异），结合数据库（如SILVA）进行物种注释，最终绘制热图、NMDS图等展示群落结构。四、案例分析题（1）可能原因：①总大肠菌群包含大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌等，部分菌株可在自然环境中存活（如土壤、植物表面），而粪大肠菌群（44.5℃培养）仅指示近期粪便污染。若河流周边存在非粪便来源的总大肠菌群（如农业径流携带的土壤微生物），可能导致总大肠菌群超标但粪大肠菌群未检出；②污水处理厂出水可能经氯消毒，粪大肠菌群对消毒剂更敏感（因44.5℃培养的菌株多为肠道原居菌，抗逆性弱），而部分总大肠菌群（如克雷伯氏菌）抗氯能力较强，消毒后仍存活；③采样时间与污染事件不同步：若粪便污染发生在采样前较久（超过粪大肠菌群存活期），其已死亡，而总大肠菌群因环境适应性强仍存在；④检测方法误差：粪大肠菌群检测可能因培养基质量、培养温度偏差（如未严格控制44.5℃）导致漏检。（2）验证及处理措施：①重复采样检测：在同一位置增加采样频率（如连续3天采样），观察结果是否稳定；②增加辅助指标：检测肠球菌（另一种粪便指示菌），若肠球